熒光定量PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)方法：
1．取增菌液1ml加到1.5ml無菌離心管中，10,pm離心5min，棄去上清；加入50ul DNA提取液，充分混勻后沸水浴5 min，
13,pm離心5min，取上清液進(jìn)行檢測或保存于-20℃以待檢測。
2．將PCR反應(yīng)液置室溫平衡，融化后取Taq酶,按管加入Taq酶，即每個(gè)測試反應(yīng)體系配制為：PCR反應(yīng)液22.5ul+0.4ul
Taq酶。
3．加入模板：將保存在-20℃的核酸提取物置室溫解凍，以13,pm離心5min。陰、陽性對照使用前置室溫解凍。在每個(gè)
PCR反應(yīng)管中分別加入步驟1中處理過的模板或陰、陽性對照各2ul，蓋好管蓋，置于PCR儀上，記錄相應(yīng)樣品號。
4．上機(jī)擴(kuò)增、檢測區(qū)：反應(yīng)條件為95℃：3min，1個(gè)循環(huán)；95℃：5sec，60℃：40sec（信號采集），40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)體系設(shè)為25ul。對于多通道熒光PCR儀，信號采集時(shí)設(shè)定為Fam熒光素。
試劑盒中含有沙門氏菌特異的引物，當(dāng)樣品中含有沙門氏菌時(shí)，前增菌后提取的沙門氏菌DNA通過PCR成指數(shù)擴(kuò)增，在反應(yīng)過程中沙門氏菌特異的熒光探針跟靶核酸雜交,同時(shí)被Taq酶水解,把探針上的熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分開,從而通過熒光增量來實(shí)時(shí)判斷沙門氏菌的存在。
試劑盒的保存條件及有效期
1．本試劑盒于-20℃保存。2．有效期為6個(gè)月。
更新時(shí)間：2017-12-12 
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