WB實驗代測中的顯影原理

　　WB，也稱Western blot、Western blotting、Western印跡，是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。Western可以參考如下步驟進行操作。

　　與southern或northern雜交方法類似，但western免疫印跡采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過page分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。

　　進行WB實驗代測時設(shè)置的對照

　　成功進行WB實驗代測，則設(shè)置合適正確的對照是*的，只要正確設(shè)置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，并保證實驗結(jié)果的準確性和特異性！一般需要設(shè)置的對照如下：陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率；陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性；二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性；內(nèi)參對照：檢測標本的質(zhì)量和二抗系統(tǒng)；空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質(zhì)和封閉的效果。